蛋白质纯化指南 原著第2版 导读版

1 (p1): 1．为什么需要纯化酶？
1 (p2): 第一部分 建立纯化程序
9 (p3): 2．蛋白质纯化的策略和思路
10 (p4): 1．总体思路
15 (p5): 2．蛋白质来源
16 (p6): 3．提取
17 (p7): 4．批量纯化的步骤
18 (p8): 5．纯化的精制步骤
19 (p9): 6．结论
19 (p10): 参考文献
21 (p11): 3．生物信息学在蛋白质纯化方案设计中的应用
22 (p12): 1．从氨基酸序列中可以了解到什么
25 (p13): 2．仍不能预测到的是什么
26 (p14): 3．结论
27 (p15): 参考文献
29 (p16): 4．制作一张蛋白质纯化的汇总表
29 (p17): 1．引言
32 (p18): 2．脚注的重要性
32 (p19): 3．SDS-聚丙烯酰胺凝胶分析对于主要蛋白质组分的价值
32 (p20): 4．常见的错误和问题
32 (p21): 第二部分 处理蛋白质和酶的常规方法
37 (p22): 5．建立一个实验室
38 (p23): 1．支撑材料
39 (p24): 2．分析检测的必要条件
40 (p25): 3．蛋白质分级的必要条件
43 (p26): 6．缓冲液：原理和操作
43 (p27): 1．引言
44 (p28): 2．理论
45 (p29): 3．缓冲液的选择
48 (p30): 4．缓冲液的准备
49 (p31): 5．挥发性缓冲液
50 (p32): 6．宽范围的缓冲液
50 (p33): 7．缓冲液储备液的配制
56 (p34): 参考文献
57 (p35): 7．酶活的测定
58 (p36): 1．引言
58 (p37): 2．催化活性的原理
64 (p38): 3．酶活性的测定
69 (p39): 4．反应分析混合物的配方设计
71 (p40): 5．讨论
71 (p41): 致谢
71 (p42): 参考文献
73 (p43): 8．蛋白质定量
74 (p44): 1．引言
75 (p45): 2．准备试剂的说明
80 (p46): 3．紫外光谱吸收方法
83 (p47): 4．染料染色蛋白质分析
85 (p48): 5．考马斯亮蓝蛋白质检测法（Bradford法）（范围：1-50μg）
86 (p49): 6．Lowry检测法（Alkaline Copper还原法）（范围：5-100μg）
88 (p50): 7．二喹啉甲酸检测法（BCA法）（范围：0.2-50μg）
89 (p51): 8．胺衍生法（范围：0.05-25μg）
91 (p52): 9．基于去垢剂的荧光检测法（范围：0.02-2μg）
91 (p53): 10．总论
94 (p54): 致谢
94 (p55): 参考文献
97 (p56): 9．蛋白质浓缩和其他溶解物的去除
98 (p57): 1．层析
103 (p58): 2．电泳
104 (p59): 3．透析
107 (p60): 4．超滤
113 (p61): 5．冷冻干燥
116 (p62): 6．沉淀
118 (p63): 7．结晶
118 (p64): 参考文献
121 (p65): 10．蛋白质稳定性的保持
121 (p66): 1．蛋白质失活的原因
122 (p67): 2．常规处理方法
122 (p68): 3．浓缩和溶解条件
123 (p69): 4．稳定性试验和储藏条件
124 (p70): 5．蛋白质水解和蛋白酶抑制剂
125 (p71): 6．蛋白质活性损失
125 (p72): 第三部分 重组蛋白质的表达和纯化
131 (p73): 11．有效表达重组蛋白质方法的选择
132 (p74): 1．引言
133 (p75): 2．大肠杆菌（Escherichia coli）
135 (p76): 3．毕赤酵母（Pichia pastoris）
136 (p77): 4．杆状病毒／昆虫细胞
138 (p78): 5．哺乳动物细胞
139 (p79): 6．蛋白质特性
143 (p80): 7．重组蛋白质的应用
144 (p81): 8．结论
144 (p82): 参考文献
149 (p83): 12．细菌系统内外源蛋白质的表达
150 (p84): 1．引言
150 (p85): 2．用E.coli表达外源蛋白质
151 (p86): 3．设计一个细菌表达方案
152 (p87): 4．方案条件的评估
152 (p88): 5．目标蛋白的分析
153 (p89): 6．克隆
155 (p90): 7．准备T4 DNA聚合酶-处理的DNA片段
156 (p91): 8．E.coli细胞质中的表达
157 (p92): 9．E.coli细胞质中目标蛋白的表达
157…